罗氏沼虾豚鼠气单胞菌的分说判断（二）

2.4细菌16SrRNA份子判断

16S rRNA PCR产物电泳服从(图4)表明,罗氏从细菌 菌株的DNA模板中扩增出巨细约为1400 bp摆布的片 段,适宜预期服从,序列号为MN736843,将基因序列经由NCBI妨碍同源比对于合成,服从展现与该序列同 源性比最高的菌株均是豚鼠气单胞菌，将序列与已经知 序列构建零星发育树(图5),沼虾可能看出,该菌株与豚鼠气单胞菌(A. caviae)聚为一个分支,散漫生化试验以及革 兰氏染色等服从,可判断该分说菌株为豚鼠气单胞菌。

2.5家养熏染

经由家养熏染的罗氏沼虾泛起与做作水域患病虾 相似的症状,熏染罗氏沼虾泛起鳃丝红肿,鳃丝概况出 现黑斑等症状(图6),熏染组在7天内全副降生，而对于 照组不泛起颇为。气单从家养熏染挨近降生的胞菌罗氏沼虾 肝胰腺机关内再次妨碍细菌分说纯化，将分说菌株再 次妨碍心理生化试验以及份子学判断等,分断患上到与原分 离菌株相同的试验服从,证实该分说菌株为罗氏沼虾致病菌-豚鼠气单胞菌(A.caviae).

3品评辩说

豚鼠气单胞菌(A.caviae)隶属于气单胞菌科.气单 胞菌属，是说判劫持中国水产养殖植物瘦弱的主要致病菌之一,可能导致日本鰻鲡(Anguillajaponica).胡子鲶(Clarias fuscus).中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis). 中国 对于虾(Penaeus chinensis). 南方鲇(Silurus meriordinalis Chen)、中华鳖(Triongxsinensis)等多种水产植物熏染。罗氏本次钻研从患病的沼虾罗氏沼虾体内分说出致病 菌，井将患上到的豚鼠优势菌株经由细菌形态审核.革兰氏染 色、溶血试验以及心理生化合成可开始分说该分说菌 株为豚鼠气单胞菌(A. caniae).其16S rRNA基因序列 构建进化树,气单服从展现该分说菌株与豚鼠气单胞菌聚 为一族,综合一着实施服从可判断该分说菌株为豚鼠 气单胞菌。运用该分说菌株对于瘦弱罗氏沼虾妨碍家养 熏染.熏染后的胞菌罗氏沼虾展现出与做作水城条件下患 病虾相似的症状,并对于熏染后的罗氏沼虾再次妨碍细 菌分高纯化.患上到与豚鼠气单胞菌相似的菌株,进逐个步: 证明了该细菌在罗氏沼虾体内的致病性,同时也对于豚 鼠气单胞菌的病原钻研质料妨碍了确定的填补。

对于分说菌株的心理生化特色妨碍判断,该病原菌 对于氧化酶、阿拉伯糖、说判葡萄糖产酸、罗氏卵白胨水.精氨酸水 解酶、明胶.苯丙氨酸为阴性:硫化氢.丙二酸盐.赖氨 酸脱发酶。鸟氨酸脱羧酶。枸缘酸盐.V-P .葡萄糖酸盐 为阴性,豚鼠气单胞菌的心理生化特色存在菌株差距 性，本钻研分高的豚鼠气单胞菌对于枸橼酸盐以及卵白胨 水的判断服从与方式气单胞菌相同,泛起上述差距的 原因可能是由于养殖情景、天气条件.地舆位置.寄主 体差距组成的。当初.,在水产植物中普遍运用抗菌药 物对于疾病妨碍防治，本次钻研的药敏试验服从表明,该 分说菌株对于头孢曲松.氣霉素、氟苯尼考四环素、多西 环素s种药物高度敏感,对于卡那霉素1种药物中度敏 感.对于环丙沙星。诺氟沙星、红霉素.阿奇霉素新生霉 素.链霉素.复方新诺明以及利福平8种药物耐药。本次 钻研服从与已经报道的其余种类分逾越的脉鼠气单胞菌 的药物敏理性存在一-定差距1,这表明豚鼠气单胞菌 对于药物敏理性存在一-定的差距,这可能以及差距的地域。 差距养殖情景中药物种类以及药物运用水平差距有对于细菌的判断措施有良多,好比环介导等温扩 增技术.单克隆抗体以及直接ELISA法等.16SrRNA在 细菌染色体的基因组中普遍存在,含高度激进区城且 份子巨细不断。基于I6SrRNA基因序列合成具备简 易、高效等短处，已经成为细菌判断以及亲缘关连分说 的逐个种实用的工具,可是由于I6SrRNA可能存在逐个些 不清晰的位点且基因数目有限,以是给序列的合成带 来利便，本次钻研对于分说细菌的16SrRNA基因及其系 统进化树妨碍合成,并与心理生化特色以及革兰氏染色 等措施相散漫,进而分说该分说菌株为脉鼠气单胞菌， 后退了细菌判断服从的精确性以及可信度。

当初，已经判断的气单胞菌属主要分说自人以及差距 的植物寄主:从患病水沉闷物以及人熏染的伤口中分说-有的还能在食物中分说纯化患上到PPABLOS等 从腹泻病患.饮水以及食物辨此外气单型菌妨碍判断﹐ 服从表明,人源气单胞菌以及饮水源气单型菌较为挨近， 剖析气单型菌可能经由水源传抵达人类,从而导致人 癸发生疾病P樊海平等*从爆发败血症的中国对于虾 分说纯化出豚鼠气单胞菌以及嗜水气单胞菌,可是对于 从罗氏沼虾中分说到豚鼠气单胞菌以及以豚鼠气单胞 菌熏染为主的罗氏沼虾疾病的报道较少,罗氏沼虾豚 鼠气单胞菌是否可能导致人以及其余水沉闷物发病﹐它 以及人源气单胞菌有无亲缘关连,以及其致病机理均有 特进一步钻研。因此,前期还需要进一步妨碍该病璧 菌的盛行病学审核，清晰其发病的纪律,并确认其危害 的工具以及钻研其致胸机理等,将更有利于对于该致病 菌引起的罗氏沼虾疾病妨碍实用的防控,增长罗氏沼 虾财富的瘦弱睁开-

抗生素等药物是坚持水产养殖业植物瘦弱破费以 及病 例治的紧张道路。可是由于之后水产市场抗生 素种类太多,以及用药习气纷比方样，导政渔药运用相对于 凌乱,细菌的耐药天气也越来越严正,以是在水产植物 中坚持生素药物的抉择以及运用确定要有迷信性,对于病 瓯菌揉运用抗生素等药物治疗,必需参考其药敏试验 服从,严厉凭证水产药物运用的相关纪律﹐同时还要注 愈穿梭用药以及药物运用浓度.尽管纵然防止药物的残留， 本次钻研为罗氏沼虾豚鼠气单厩菌判断以及病害劭治 提供确定的参考以及实际根基-

4论断

本钻研从患病的罗氏沼虾中分说出一糅致病菌- 豚鼠气单胞菌,并经由对于其菌落形态特色.心理生化鉴 定并散漫16SrRNA序列合成,可分说该致病菌为豚鼠 气单慰菌.家养熏染试验证明了该致病菌对于罗氏沼虾 具备较强的致病性.药敏试验服从表明该致病菌对于头 泡曲松.氯霉素.氟苯尼考.四环素.多西环素5种药物 高度敏感,而对于环丙沙星.诺氟沙星.红霉素.阿奇霉 素.新生霉素链霉素.复方新诺明以及利福平8种药物 耐药,因此可参考药敏试验服从对于罗氏沼虾豚鼠气单 巍菌运用适宜的药物妨碍治疗﹐以抵达最佳治疗效 果-水钻研所选的环丙沙星以及氯霉素仅用来钻研菌棵 的抗药性，并不能用于破费,面氟苯尼考可能作为罗氏 沼虾豚鼠气单脱菌的主要治疗药物。这也握醒养殖户 以及钻研破费职员在罗氏沼虾养殖历程中,要在国家觉 许药物运用规模之内,选取最佳眩感药物用来妨碍病 害防治,后退用药的针对于性，做到公平谨严用药,尽管纵然 削减药物残留.o研笼为进一步品评辩说罗氏沼虾豚鼠气 单胞菌的判断以及防治提供确定的参考.

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